單克隆抗體制備它常用于小量培養(yǎng)到大規(guī)模培養(yǎng)的過渡階段,通過轉(zhuǎn)瓶不斷旋轉(zhuǎn)使細胞呈懸浮狀態(tài),在培養(yǎng)瓶中均勻分布,充分利用養(yǎng)分,并擴大氣液接觸面,便于氧氣的傳遞。而工業(yè)化、商業(yè)化大規(guī)模懸浮培養(yǎng)多采用生物反應器,其深層培養(yǎng)可分為分批式、流加式、連續(xù)式和灌注式等。培養(yǎng)法是應用一種對細胞無害的顆粒作為細胞生長的介質(zhì),細胞附著于其表面生長,在持續(xù)攪動作用下微載體懸浮于培養(yǎng)液中。
 

　　單克隆抗體制備過程與原理：
 

　　1、免疫動物
 

　　免疫動物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產(chǎn)生致敏B淋巴細胞的過程。一般選用6-8周齡雌性Balb/c小鼠，按照預先制定的免疫方案進行免疫注射?？乖ㄟ^血液循環(huán)或淋巴循環(huán)進入外周免疫器官，刺激相應B淋巴細胞克隆，使其活化、增殖，并分化成為致敏B淋巴細胞。
 

　　2、細胞融合
 

　　采用眼球摘除放血法處死小鼠，無菌操作取出脾臟，在平皿內(nèi)擠壓研磨，制備脾細胞懸液。將準備好的同系骨髓瘤細胞與小鼠脾細胞按一定比例混合，并加入促融合劑聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，各種淋巴細胞可與骨髓瘤細胞發(fā)生融合，形成雜交瘤細胞。
 

　　3、選擇性培養(yǎng)
 

　　選擇性培養(yǎng)的目的是篩選融合的雜交瘤細胞，一般采用HAT選擇性培養(yǎng)基。在HAT培養(yǎng)基中，未融合的骨髓瘤細胞因缺乏鳥嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶，不能利用補救途徑合成DNA而死亡。未融合的淋巴細胞雖具有鳥嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶，但其本身不能在體外長期存活也逐漸死亡。只有融合的雜交瘤細胞由于從脾細胞獲得了鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶，并具有骨髓瘤細胞能無限增殖的特性，因此能在HAT培養(yǎng)基中存活和增殖。